明膠空心膠囊中鉻的檢測培訓資料 ——轉自陜西省食品藥品檢驗所
明膠空心膠囊中鉻的檢測培訓資料
——轉自陜西省食品藥品檢驗所
2012年5月
主要內容:
一、背景資料
二、檢測方法
三、方法學(xué)驗證
四、注意事項
一、 背景資料
2012年4月15日,央視《每周質(zhì)量報告》欄目披露了國內部分醫藥生產(chǎn)企業(yè)使用皮革明膠制造膠囊,空心膠囊鉻超標,在社會(huì )上反響巨大。
硬膠囊 | 動(dòng)物來(lái)源:明膠空心膠囊 植物來(lái)源:主要是植物纖維素 |
軟膠囊 | 成膜材料和內容物同時(shí)加工成產(chǎn)品(海藻酸鹽、明膠) |
圖表 1 明膠殼分類(lèi)
明膠空心膠囊(Vacant Capsules)
系由膠囊用明膠加輔料制成的空心硬膠囊。由帽、體兩節膠囊殼組成,可容納各種藥粉、液體、半固體和藥片??裳陲椝幬锏漠愇?,易于吞服,具良好的崩解能力,較長(cháng)的保質(zhì)期等優(yōu)點(diǎn)。
規格尺寸:
從大到小依次為000#、00#、0#、1#、2#、3#、4#、5#等8種型號。
明膠藥用空心膠囊的成分
主要原材料:
由明膠、甘油、水以及其它的藥用材料(TiO2)組成。明膠約占所有原輔料的90%以上。明膠是從動(dòng)物(牛、馬、豬、魚(yú)、驢)的皮、骨、腱、鱗等含膠原蛋白的組織,經(jīng)過(guò)酸、堿或酶水解處理以后降解生產(chǎn)的非均勻多肽混合物,由多種氨基酸所組成。
明膠成分:85~90%蛋白質(zhì),0.3%~0.2%礦物質(zhì),9%~12%水分。
外觀(guān)近于無(wú)色或者呈淡黃色,為透明、無(wú)特殊臭味的固體,分子量為1.75-45萬(wàn)。
明膠的分類(lèi)和行業(yè)標準
根據用途分為三類(lèi):藥用明膠,食用明膠和工業(yè)明膠(照相明膠)。
有關(guān)標準
膠囊用明膠:《中國藥典》2010年版(二部)(Cr:2.0mg/kg)
Gelatin:
EP7.0/BP2010(Cr:10ppm)
USP34(Cr沒(méi)有規定)
JP16(Cr沒(méi)有規定)
藥用明膠:QB-2354-2005(Cr: :2.0mg/kg)(QB:輕工行業(yè)標準)
食品添加劑明膠:GB 6783-94 (A級:1.0mg/kg,B級:2.0mg/kg)
食用明膠:QB/T 4087-2010 (Cr:2.0mg/kg)
工業(yè)明膠:QB/T 1995-2005 (Cr:沒(méi)有規定)
二、檢測方法
《中國藥典》2010年版(二部)明膠空心膠囊項下鉻檢查項(P1204)
取本品0.5g,置聚四氟乙烯消解罐內,加硝酸5~10ml,混勻,浸泡過(guò)夜,蓋上內蓋,旋緊外套,置適宜的微波消解爐內,進(jìn)行消解。消解*后,取消解內罐置電熱板上緩緩加熱至棕紅色蒸汽揮盡并近干,用2%硝酸轉移至50ml量瓶中,并用2%硝酸稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液;同時(shí)制備試劑空白溶液;另取鉻單元素標準溶液,用2%硝酸稀釋制成每1ml含鉻1.0µg的鉻標準貯備液,臨用時(shí),分別精密量取鉻標準貯備液適量,用2%硝酸溶液稀釋制成每1ml含鉻0-80ng的對照品溶液。
取供試品溶液與對照溶液,以石墨爐為原子化器,照原子吸收分光光度法(附錄IV D*法),在357.9nm的波長(cháng)處測定,計算,即得。含鉻不得過(guò)百萬(wàn)分之二(2mg/kg)。
檢測方法-試驗設備
儀器
原子吸收分光光度計(含石墨爐原子化裝置)
電子天平
微波消解儀
電熱板或其他趕酸設備,如:恒溫消解儀、趕酸器等。
試劑
硝酸(優(yōu)級純,國藥集團)
鉻單元素標準溶液(1000µg/ml,國家標準物質(zhì))
檢測方法-試驗步驟
檢驗樣品
膠囊劑(由明膠空心膠囊殼裝載的膠囊)
檢驗項目
明膠空心膠囊中的鉻
檢驗所需檢品量的參考值
膠囊規格 | 平均重量(g/粒,參考值) | 一次實(shí)驗量(粒) | 檢驗3倍量(粒) |
0# | 0.093 | 15 | 45 |
1# | 0.074 | 15 | 45 |
2# | 0.061 | 20 | 60 |
3# | 0.050 | 20 | 60 |
4# | 0.038 | 30 | 90 |
空心膠囊殼的制備
參考附錄IE 膠囊劑裝量差異項(附錄8)
具體制備方法:傾出膠囊劑的內容物,膠囊殼用棉棒或小刷拭凈(不得損壞囊殼),放置,待用。
膠囊劑中明膠空心膠囊殼中鉻的測定方法
1. 鉻標準貯備液的制備:
取鉻單元素標準溶液(1000µg/ml),用2%硝酸稀釋制成每1ml含鉻1.0µg的鉻標準貯備液(不得超過(guò)一個(gè)月)。
2. 標準溶液的制備:
分別精密量取鉻標準貯備液適量,用2%硝酸溶液稀釋制成每1ml含鉻0-80ng的對照品溶液。臨用時(shí)現配。
膠囊劑中明膠空心膠囊殼中鉻測定方法(過(guò)夜)
1. 供試品溶液的制備:
精密稱(chēng)取本品0.5g,置聚四氟乙烯消解罐內,加硝酸5~10ml,混勻,浸泡過(guò)夜,蓋上內蓋,旋緊外套,置適宜的微波消解。消解*后,取消解內罐置電熱板上緩緩加熱至紅棕色蒸汽揮盡并近干,用2%硝酸轉移至50ml量瓶中,并加2%硝酸稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液;同法制備試劑空白溶液,作為空白校正。
2. 測定法:
取供試品溶液與對照品溶液適量,以石墨爐為原子化器,照原子吸收分光光度法(《中國藥典》2010年版(二部)附錄IV D*法),在357.9nm的波長(cháng)處測定,計算,即得。
膠囊劑中明膠空心膠囊殼中鉻新測定方法(不過(guò)夜)
取樣品0.5g,置聚四氟乙烯消解罐內,加硝酸5~10ml,100℃30分鐘使溶解,補加硝酸2ml,加水1ml,待冷卻至室溫,加0.5ml氫氟酸,進(jìn)行*次消解(參考程序為10min升溫至120℃,保持5min,10min升溫至140℃,保持15min)。冷卻放氣(無(wú)需*打開(kāi)消解罐蓋,之需擰松即可)。隨后進(jìn)行第二次消解(參考程序為10min升溫至150℃,保持5min,10min升溫至185℃,保持15min)。冷卻后,加熱趕酸至1~2ml,2%硝酸溶液至50ml,作為供試品溶液。同法制備試劑空白溶液;另取鉻單元素標準溶液,用2%硝酸稀釋制成每1ml含鉻1µg的鉻標準貯備液,臨用時(shí),分別精密取鉻標準貯備液適量,用2%硝酸溶液稀釋制成每1ml含鉻0-80ng的對照品溶液。
測定法:
取供試品溶液與對照品溶液適量,以石墨爐為原子化器,照原子吸收分光光度法(《中國藥典》2010年版(二部)附錄IV D*法),在357.9nm的波長(cháng)處測定,計算,即得。
三、方法學(xué)驗證
線(xiàn)性:
制備含鉻的對照品溶液至少5份,濃度依次遞增,zui高濃度吸收值應在0.8以下,保證具有較好的線(xiàn)性范圍,相關(guān)系數(r)≥0.99.檢驗波長(cháng):357.9nm。
準確性:
應進(jìn)行整個(gè)實(shí)驗過(guò)程的(包括前處理)方法學(xué)回收率驗證,暫定回收率應為80%-120%的范圍內。每次測定需進(jìn)行隨行回收試驗。
重復性:
取限度濃度的標準品溶液重復測定5次,吸收度(測定值)的變化范圍(RSD)不得過(guò)5%。
定量限(LOQ):
本方法定量限應不低于0.5mg/kg。
四、注意事項
1.樣品前處理是試驗中的關(guān)鍵步驟,既要保證消解*,又要保證消解過(guò)程樣品中的鉻不損失,因此試驗中建議加入10ml硝酸(優(yōu)級純),并需要浸泡過(guò)夜后一步消解/或不過(guò)夜二步消解。參考消解程序為:5min由室溫升至120℃,維持3min;6min由120℃升至150℃,維持2min;6min由150℃升至180℃,維持20min。
注:國產(chǎn)微波消解的參考消解程序:120℃,維持2min;145℃,維持2min;160℃,維持2min。
2.為避免玻璃容器的干擾,試驗中宜采用塑料容量瓶(聚丙烯材質(zhì))定容。
3.不同原子吸收儀試驗參數可能不同,可根據原子吸收儀說(shuō)明書(shū)中推薦程序設 定測定參數(參考石墨爐升溫程序如下:5s升溫至100℃,保持10s;5s升溫至500℃,保持10s;0s升溫至2100℃,保持3s;0s升溫至2200℃,保持2s)
4. 含鈦白 粉的膠囊殼(不透明膠囊)建議在微波消解時(shí),樣品中除加硝酸外可另加0.5ml氫氟酸,其他同供試品溶液制備,注意空白校正和方法學(xué)驗證。
5. 實(shí)驗用水:應采用純化水,儲藏水的容器宜用聚丙烯塑料材料制成,不宜選用玻璃容器長(cháng)期儲存。
6. 試劑應采用優(yōu)級純及以上級別試劑。
7. 試驗中所用容器及器皿均需在每次使用前用鹽酸溶液(濃鹽酸:水/1:1)浸泡1h,再用硝酸溶液(濃硝酸:水/1:1)浸泡1h,再用純化水沖洗干凈后使用。微波消解容器應采用儀器清洗程序清洗,不得采用鉻酸清洗液洗滌容器。
8.可供選擇的鉻元素標準溶液(1000µg/mL)由國家有色金屬及電子材料分析測試中心提供;也可以由中國計量科學(xué)研究院提供。鉻對照貯備溶液應密封,冷暗處保存。
9.結果判斷:標準規定不得過(guò)百萬(wàn)分之二(2mg/kg)。由于微量測定,結果的偏差會(huì )較大,一般兩份樣品的相對偏差≤10%,取平均值即可(低濃度尤其明顯)。
10.樣品檢測應嚴格遵守《中國藥典》2010年版(二部)“明膠空心膠囊”鉻項下方法試驗,如因試驗需要改變樣品前處理方法及檢測波長(cháng),應按照實(shí)驗室有關(guān)質(zhì)量管理程序(偏離)進(jìn)行。
11.若試劑空白溶液測定值過(guò)高(宜不超過(guò)標準曲線(xiàn)zui低濃度點(diǎn)吸光度值的50%),應換用空白干擾小的溶液重新試驗。
12.注意試驗所需的所有儀器均應在計量檢定合格效期內。
13.若供試品溶液濃度過(guò)高,可稀釋到標準曲線(xiàn)范圍內進(jìn)行測定。
14.由于硬、軟膠囊殼中含有不同比例的甘油(軟膠囊比例較高,甘油:明膠比例可達1:2),在進(jìn)行微波消解時(shí),甘油可與硝酸產(chǎn)生反應,容易爆罐,請注意消解時(shí)的安全監控,盡量在前處理時(shí)預消解。